Gen GPR54 jako regulator okresu dojrzewania ad

Pacjenci dotknięci chorobą mają całkowity lub częściowy brak pulsacji hormonu luteinizującego indukowanej przez endogenny hormon uwalniający gonadotropinę i mają normalną reakcję na fizjologiczne zastąpienie egzogennego hormonu uwalniającego gonadotropiny. Te obserwacje lokalizują defekt na anormalność syntezy, wydzielania lub aktywności hormonu uwalniającego gonadotropiny.2-4 Korzystając z analizy sprzężeń i badania przesiewowego kandydatów na geny, zidentyfikowaliśmy mutacje w genie receptora sprzężonego z białkiem G, GPR54, w dużej, spokrewnionej z Arabią Saudyjską rodzinie z idiopatycznym hypogonadotropowym hipogonadyzmem i jednym niepowiązanym czarnym mężczyzną w Stanach Zjednoczonych. Dzięki komplementarnemu podejściu wygenerowaliśmy myszy z niedoborem Gpr54 o fenotypie, który wykazał brak rozwoju seksualnego u dorosłych i niskie stężenie gonadotropin we krwi – cechy, które bardzo przypominają ich ludzkie odpowiedniki.
Metody
Historia rodzinna
Rysunek 1. Rycina 1. Rodowód rodziny z hipogonadyzmem hipogonadotropowym idiopatycznym. Kwadraty reprezentują członków rodziny męskiej, okręgi członków rodziny żeńskich, diamenty wielu członków rodziny z podaną liczbą, a stałe symbole dotyczyły członków rodziny; proband jest oznaczony strzałką. L oznacza leucynę i serynę S w pozycji 148 genu GPR54. Zaadaptowane za zgodą Bo-Abbasa i wsp.5 oraz Acierno i wsp. 6
Duża rodzina Arabii Saudyjskiej, w której doszło do trzech małżeństw między pierwszymi kuzynami, zwróciła się o pomoc lekarską na bezpłodność (ryc. 1). Sześcioro z 19 potomstwa (4 mężczyzn i 2 kobiety) spełniało standardowe kryteria diagnostyczne dla idiopatycznego hipogonadyzmu hipogonadotropowego (niewłaściwie niskie stężenia gonadotropin w obecności przedwczesnych stężeń steroidów płciowych, prawidłowej funkcji przedniego płata przysadki i normalnych ustaleń dotyczących obrazowania mózgu) i miał reakcję na egzogenny, pulsacyjny hormon uwalniający gonadotropiny, jak opisano wcześniej5. Pobieranie próbek krwi do badań genetycznych i protokołów klinicznych zostało zatwierdzone przez Podkomitet ds. Humanistyki w Szpitalu Ogólnym w Massachusetts, a wszyscy uczestnicy udzielili pisemnej świadomej zgody .
Analiza mutacji
Poprzednio wykazano łączność z interwałem 1,06 Mb na chromosomie 19p13.3.6 Analiza mutacji genów kandydujących, zaczynając od GPR54, została zainicjowana przy użyciu DNA wyekstrahowanego z pełnej krwi. Sekwencja komplementarnego DNA GPR54 (cDNA) (numer dostępu GenBank AY253981) została dopasowana do opublikowanej sekwencji genomowej7 w celu identyfikacji struktury genomowej. Szczegóły dotyczące amplifikacji, sekwencjonowania, populacji kontrolnych, przejściowych transfekcji polimerazy, sekwencjonowania, populacji kontrolnych, przejściowych transfekcji, konstruktu kierującego i testów biochemicznych znajdują się w Dodatku (dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie http: //www.nejm .org).
Dodatkowe populacje
Aby określić, czy obserwowana zmiana w parach zasad w GPR54 była normalnymi wariantami, sprawdzono również populacje kontrolne 80 osób z Ameryki Północnej (głównie anonimowych dawców krwi), 50 osób z Bliskiego Wschodu i 50 czarnoskórych osób z Ameryki Północnej. Dodatkowych 63 pacjentów z hipogonadyzmem samoistnym hipogonadotropowym normoskopowym i 20 pacjentów z hipogonadyzmem hipogonadotropowym w wywiadzie anosmicznym (zespół Kallmanna) poddano również badaniom przesiewowym pod kątem mutacji sekwencji kodujących w GPR54
[więcej w: proteza bezklamrowa, zestaw diagnostyczny stomatologiczny, rezonans magnetyczny kręgosłupa cena ]
[patrz też: sennik oddawanie moczu, sennik klotnia, invimed gdynia ]