Gen GPR54 jako regulator okresu dojrzewania ad 5

Jajnik, jądra i nadnercza były woskowe i dzielone na 3 do 4 .m. Skrawki tkanki barwiono hematoksyliną i eozyną. Gruczoły sutków wycięto i utrwalano przez 2 do 4 godzin w temperaturze 23 ° C w utrwalaczu (sześć części absolutnego etanolu do trzech części chloroformu do jednej części lodowatego kwasu octowego), przemywano 70% etanolem przez 15 minut, ponownie uwodniono i barwiono na noc w karminie. ałunu, który gotowano przez 20 minut w 500 ml wody destylowanej. Szkiełka przemywano wzrastającymi stężeniami etanolu (70 procent, 95 procent i 100 procent) przez 15 minut każdy, oczyszczano w ksylenie przez 30 minut i montowano. Wyniki
Analiza mutacji
Powiązanie w pokrewnej rodzinie Arabii Saudyjskiej zostało wcześniej zademonstrowane na chromosomie 19p13.3 z maksymalnym dwupunktowym wskaźnikiem lod wynoszącym 5.17.6 Region kandydujący na chromosomie 19 zawierał 23 znane geny, w tym 7 GPR54, który jest wyrażany w ludzkim mózgu, przysadka i łożysko, jak oceniono za pomocą RT-PCR. 9 GPR54 ma pięć eksonów i zawiera otwartą ramkę odczytu o 1197 bp, która koduje białko o długości 398 aminokwasów.
Homozygotyczny wariant pojedynczego nukleotydu (443T> C) w eksonie 3, który zastępuje serynę w normalnej leucynie w pozycji 148 (L148S) w drugiej pętli wewnątrzkomórkowej, stwierdzono u wszystkich sześciu dotkniętych osób w rodowodzie saudyjskim i nie wystąpił w stanie homozygotycznym u każdego członka rodziny, którego nie dotyczą (wszystkie odniesienia do pozycji w parach podstawowych są zgłaszane zgodnie ze standardową numeracją i nomenklaturą17) (patrz Dodatek dodatkowy 3, dostępny wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie http://www.nejm.org ). Ten wariant nie wydaje się być polimorfizmem, ponieważ występuje tylko u dotkniętych członków rodziny; jest nieobecny w 160 chromosomach od niespokrewnionych, nieobjętych kontrolą ze Stanów Zjednoczonych i 100 chromosomów od kontroli z Bliskiego Wschodu; jest obecny w reszcie aminokwasowej, która jest konserwatywna wśród gatunków obejmujących mysz, szczura, amhioxus i rozdymkowate (numery dostępu w GenBank AF343726, BAB55447 i AAM18884 i numer dostępu Fugu Genome Server18 SINFRUP00000071513,19); i zmienia polaryzację kodowanego aminokwasu z hydrofobowego na obojętny.
Spośród 63 niespokrewnionych pacjentów z hipogonadyzmem idiopatycznym hipogonadotropowym normosfery i 20 pacjentów z zespołem Kallmanna odkryto, że jeden czarny człowiek z idiopatycznym hipogonadyzmem hipogonadotropowym ma heterozygotyczne przejście C-to-T w nukleotydie 991 w eksonie 5, w którym arginina w pozycji 331 zastąpiono przedwczesnym kodonem stop (991C> T [R331X]). Ponadto, zidentyfikowano heterozygotyczną transwersję T-to-A przy nukleotydie 1195 w eksonie 5, który zastąpił kodon stop w reszcie 399 argininą (1195T> A [X399R]) (Dodatek 3). Ta nieprzerwana mutacja prowadzi do kontynuacji otwartej ramki odczytu do sygnału poliA, bez interweniującego kodonu stop. Żadna zmiana nie została zidentyfikowana w 160 chromosomach od północnoamerykańskich kontroli lub 100 chromosomów od czarnych kontroli.
Aby potwierdzić, że mutacje nonsens i nonstop znajdują się na oddzielnych chromosomach, przeprowadzono klonowanie swoiste dla allelu. Siedemnaście klonów zawierało R331X lub X399R i nie zawierało obu klonów, potwierdzając, że te dwa warianty występują na oddzielnych allelach (czyniąc pacjenta heterozygotą złożoną) (danych nie pokazano).
RT-PCR
Produkty RT-PCR wytworzone z probandu Arabii Saudyjskiej i heterozygoty związku miały oczekiwaną wielkość dla wszystkich segmentów
[hasła pokrewne: korona cyrkonowa, zestaw diagnostyczny stomatologiczny, ministerstwo zdrowia logo ]
[patrz też: zniesienie lordozy, enolaza, dexacaps ]